Giardia арванхоёрдугаар гэдэс нь гэдэсний халдварт өвчин үүсгэдэг шимэгч организм бөгөөд ялангуяа суулгалт өвчний эмнэлзүйн шинж тэмдэгтэй бага насны хүүхдүүдэд түгээмэл тохиолддог.Эсийн гаднах G. duodenalis нь эсийн доторх олигомержилт төст рецептор 3 (NLRP3) холбох нуклеотидыг идэвхжүүлж, эсийн гаднах цэврүүт (EV) шүүрлээр дамжуулан эзний үрэвслийн хариу урвалыг зохицуулдаг гэж бид өмнө нь мэдээлж байсан.Гэсэн хэдий ч энэ үйл явцад оролцдог эмгэг төрүүлэгчтэй холбоотой duodenococcal EV (GEV) -ийн яг молекулын хэлбэр, лямблиазын үед NLRP3 үрэвслийн гүйцэтгэх үүрэг тодорхойгүй хэвээр байна.
GEV дахь рекомбинант эукариот экспрессийн плазмид pcDNA3.1(+)-альфа-2 ба альфа-7.3 гиардинуудыг бүтээж, хулганы анхдагч хэвлийн макрофаг руу шилжүүлэн, үрэвслийн зорилтот молекул каспас-1-ийг хэмжих замаар илрүүлсэн.p20 илэрхийллийн түвшинг шалгасан..G. duodenalis альфа-2 ба альфа-7.3 гиардиныг анх NLRP3 үрэвслийн (NLRP3, про-интерлейкин-1 бета [IL-1β], про-каспаз-1 ба каспас-1 p20), IL-ийн шүүрлийг хэмжих замаар тодорхойлсон.1β түвшин, апоптозын толботой уураг (ASC) олигомержих түвшин, NLRP3 болон ASC-ийн иммунофлуоресцент локалчлал.Дараа нь G. duodenalis-ийн эмгэг төрүүлэгчид NLRP3 үрэвслийн гүйцэтгэх үүргийг NLRP3 идэвхжлийг хаасан (NLRP3 блоклогдсон хулгана) хулганыг ашиглан үнэлж, биеийн жин, арван хоёр гэдэсний шимэгчийн ачаалал, арван хоёр гэдэсний эд эсийн эмгэг өөрчлөлтийг хянаж үзсэн.Нэмж дурдахад бид альфа-2 ба альфа-7.3 хиардинууд нь NLRP3 үрэвсэлээр дамжуулан IL-1β-ийн шүүрлийг in vivo өдөөдөг эсэхийг судалж, хулганад G. duodenalis-ийн эмгэг төрүүлэхэд эдгээр молекулуудын үүргийг тодорхойлсон.
Альфа-2 ба альфа-7.3 гиардинууд нь in vitro NLRP3 үрэвслийн идэвхжлийг өдөөдөг.Энэ нь p20 каспас-1 идэвхжиж, NLRP3, pro-IL-1β, pro-caspase-1 уургуудын экспрессийн түвшин нэмэгдэж, IL-1β-ийн шүүрэл мэдэгдэхүйц нэмэгдэж, судсанд ASA толбо үүсэхэд хүргэсэн. цитоплазм, ASA-ийн олигомержилтыг өдөөдөг.NLRP3-ийн үрэвсэл Бэлэг эрхтний алдагдал нь хулганад G. duodenalis-ийн эмгэг төрүүлэгчийг улам хүндрүүлдэг.NLRP3-ийг блоклосон хулганаас уйланхайгаар эмчилсэн хулгануудад трофозоитын тоо нэмэгдэж, арван хоёр нугасны шилбүүрт ноцтой гэмтэл гарсан нь агшиж, салаалсан үхжилтийн криптүүдээр тодорхойлогддог.In vivo туршилтаар ямарднууд альфа-2 ба альфа-7.3 нь NLRP3 үрэвсэлээр дамжин IL-1β-ийн шүүрлийг өдөөж болохыг харуулсан бөгөөд альфа-2 ба альфа-7.3 ямардуудтай дархлаажуулалт хийснээр хулганад G. duodenalis-ийн эмгэг төрүүлэгч чанарыг бууруулсан.
Энэхүү судалгааны үр дүнг нэгтгэн авч үзвэл лямблиа альфа-2 ба альфа-7.3 нь лямблиоз өвчнөөс урьдчилан сэргийлэх ирээдүйтэй зорилт болох хулганад NLRP3-ийн үрэвслийг нэмэгдүүлж, G. duodenalis-ийн халдварыг бууруулдаг болохыг харуулж байна.
Giardia duodenum нь нарийн гэдсэнд амьдардаг эсийн гаднах эгэл биет шимэгч бөгөөд жил бүр 280 сая лямблиазын өвчлөл, ялангуяа хөгжиж буй орнуудын бага насны хүүхдүүдэд суулгалт өвчин үүсгэдэг [1].Хүмүүс M.12 нугалаа гэдэсний уйланхайгаар бохирдсон ундны ус эсвэл хоол хүнсээр халдвар авч, улмаар ходоодонд орж, ходоодны шүүсээр гадагшилдаг.Giardia duodenum trophozoites нь арван хоёрдугаар гэдэсний хучуур эдэд наалдаж, дотор муухайрах, бөөлжих, суулгах, хэвлийгээр өвдөх, турах зэрэг шинж тэмдгүүд илэрдэг.Дархлалын хомсдол, цистик фиброзтой хүмүүс халдварт өртөмтгий байдаг.Халдвар нь аман болон шулуун гэдсээр бэлгийн хавьталд ордог [2].Метронидазол, тинидазол, нитазоксанид зэрэг эмүүд нь арван хоёрдугаар гэдэсний халдварыг эмчлэхэд илүүд үздэг сонголт юм [3].Гэсэн хэдий ч эдгээр хими эмчилгээний эмүүд нь дотор муухайрах, хорт хавдар үүсгэх, генотоксик зэрэг сөрөг үр дагаварт хүргэдэг [4].Тиймээс G. duodenalis халдвараас урьдчилан сэргийлэх илүү үр дүнтэй стратеги боловсруулах шаардлагатай байна.
Үрэвсэл нь төрөлхийн дархлааны хариу урвалын нэг хэсэг болох цитозолын уургийн цогцолборын ангилал бөгөөд эмгэг төрүүлэгчийн халдлагаас хамгаалж, үрэвслийн хариу урвалыг зуучлахад тусалдаг [5].Эдгээр үрэвслийн дундаас нуклеотид холбогч олигомержилт (NOD) рецептор 3 (NLRP3) нуклеотид холбогч олигомержилт (NLRP3) нуклеотидтэй төстэй үрэвсэлт үйл явц нь янз бүрийн эмгэг төрүүлэгч/гэмтэл-холбоотой PAMP/-аар илрэх боломжтой тул маш их судлагдсан. DAMP), төрөлхийн дархлааны системийг таньж, идэвхжүүлдэг.олон үрэвсэлт өвчний үед гэдэсний гомеостазыг зохицуулдаг [6,7,8].Энэ нь хэв маягийг таних рецептор (PRR) NLRP3, адаптер апоптозын толботой уураг (ASC), эффектор прокаспаз-1 эсвэл прокаспаз-11 зэргээс бүрдэнэ.NLRP3 үрэвсэл нь Neospora caninum [9], Paracoccidioides brasiliensis [10], Leishmania судалгаанд ажиглагдсанчлан эмгэг төрүүлэгчдийн довтолгооны эсрэг хост үүрэг гүйцэтгэдэг.[11], гэхдээ NLRP3 үрэвслийн идэвхжил нь хамгаалалтын дархлааны хариу урвалыг хязгаарлаж, жишээлбэл өт хорхойн өвчний явцыг улам хүндрүүлдэг гэж мэдээлсэн байна [12].Бидний өмнөх олдворууд дээр үндэслэн бид эсийн гаднах G. duodenalis нь NLRP3 үрэвслийг эсийн доторх идэвхжүүлж, эсийн гаднах цэврүү (EVs) ялгаруулж үрэвслийн хариу урвалыг зохицуулдаг болохыг бид мэдээлсэн.Гэсэн хэдий ч in vivo G. duodenalis халдварын үед NLRP3 үрэвслийн үүргийг тодорхойлох шаардлагатай хэвээр байна.
Гиардиныг анх G. duodenalis эсийн араг ясны бүтцийн бүрэлдэхүүн хэсэг гэж тодорхойлсон бөгөөд трофозоитын хөдөлгөөн, нарийн гэдэсний хучуур эдийн эсийн бэхэлгээнд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг.Хүрээлэн буй орчинд илүү сайн дасан зохицож, эмгэг төрүүлэх чадварыг нэмэгдүүлэхийн тулд G. duodenalis trophozoites нь 8 туг, 1 дунд бие, 1 ховдолын дискээс бүрдсэн эсийн ясны өвөрмөц бүтцийг бий болгосон [14].Giardia duodenum-ийн трофозоитууд нь эсийн араг ясыг ашиглан дээд нарийн гэдсэнд, ялангуяа арван хоёр нугалам руу нэвтэрч, энтероцитэд наалддаг.Тэд эсийн бодисын солилцоог ашиглан эпителийн эсүүдэд байнга нүүж, хавсардаг.Тиймээс тэдний цитоскелетон ба хоруу чанар хоёрын хооронд нягт холбоотой байдаг.Giardia арван хоёр хуруу гэдэсний өвөрмөц гиардууд нь эсийн араг ясны бүтцийн бүрэлдэхүүн хэсэг бөгөөд [15] бөгөөд α-, β-, γ-, δ-ягардууд гэсэн дөрвөн ангилалд хуваагддаг.α-гиардины гэр бүлийн 21 гишүүн байдаг бөгөөд бүгд фосфолипидийг холбох кальциас хамааралтай байдаг [16].Тэд мөн цитоскелетоныг эсийн мембрантай холбодог.G. duodenalis-ээр үүсгэгдсэн суулгалт өвчтэй хүмүүст α-гиардинууд нь халдварын үед их хэмжээгээр илэрдэг бөгөөд дархлааг бууруулдаг [17].Giardia alfa-1 дээр үндэслэсэн гетерологийн вакцинууд нь хулганад лямблиоз өвчнөөс хамгаалагдсан бөгөөд вакцин боловсруулахад нэр дэвшигч антиген юм [18].Альфа-8 гиардин нь сийвэнгийн мембран болон флагеллад байрладаг боловч ховдолын дискэнд байдаггүй бөгөөд G. duodenalis [19] дахь трофозоитын хөдөлгөөн, өсөлтийн хурдыг нэмэгдүүлдэг.Альфа-14 гиардин нь тугны бичил гуурсан бүтцэд наалдаж, G. duodenalis [20] амьдрах чадварт нөлөөлдөг.Альфа-11 гиардин нь амьдралын мөчлөгийн туршид их хэмжээгээр агуулагддаг бөгөөд альфа-11 гиардин хэт их хэмжээгээр агуулагдах нь G. duodenalis-ийг гэмтээдэг [21].Гэсэн хэдий ч альфа-2 гиардин ба альфа-7.3 гиардин нь G. duodenalis халдвар болон тэдгээрийн үндсэн механизмаас хамгаалдаг эсэх нь тодорхойгүй байна.
Энэхүү судалгаанд рекомбинант эукариот экспрессионал плазмид pcDNA3.1(+)-альфа-2 гиардин ба pcDNA3.1(+)-альфа-7.3 гиардиныг хулганын анхдагч хэвлийн макрофаг руу шилжүүлэн NLRP3 хостыг идэвхжүүлсэн.Дараа нь үрэвслийн зорилтот газруудыг шалгасан.Мөн бид G. duodenalis-ийн эмгэг төрүүлэхэд NLRP3 үрэвслийн гүйцэтгэх үүргийг үнэлж, альфа-2 ба альфа-7,3 ямарднууд нь NLRP3 үрэвслийн идэвхжлийг in vivo өдөөдөг эсэхийг судалж, ямардны эдгээр хоёр үүрэг нь Г. G. duodenalis.Бидний нийтлэг зорилго бол G. duodenalis халдвараас урьдчилан сэргийлэх ирээдүйтэй зорилтуудыг боловсруулах явдал байв.
Зэрлэг төрлийн (WT) C57BL/6 5-8 долоо хоногтой эм хулганыг Ляонин Чаншэнгийн туршилтын амьтны төвөөс (БНХАУ, Ляонин) худалдаж авсан.Хулганууд усанд чөлөөтэй нэвтэрч, ариутгасан хоол хүнс авч, 12/12 цагийн гэрэл/харанхуйн тойрогт байлгасан.Халдвар авахын өмнө хулгана ампициллин (1 мг/мл), ванкомицин (1 мг/мл), неомицин (1.4 мг/мл) (бүгдийг Хятад, Шанхай хотоос худалдаж авсан, хиймэл организм) агуулсан ундны усанд антибиотикийг ad libitum уусан. ].].24 цагийн турш идэж уух чадвараа алдаж, биеийн жингийн ≥ 20%-иар хасагдсан хулганыг умайн хүзүүг мулталж хүний ​​аргаар устгасан.
WB G. duodenalis trophozoites (American Type Culture Collection, Manassas, USA) нь 12.5% ​​ургийн үхрийн ийлдэс (FBS; Every Green, Zhejiang, China) болон 0.1% үхрийн цөс (Sigma-Aldrich, St. Missouri, USA) -аар нэмэгдүүлсэн. ).АНУ) микроаэробик нөхцөлд.Нийлмэл трофозоитуудыг мөсөн дээр цуглуулж, цаашдын үржилд зориулж 1: 4 харьцаатай дамжуулав.
Giardia арванхоёрдугаар гэдэсний уйланхайг өмнө нь тайлбарласны дагуу үүсгэсэн [23], трофозоитуудыг логарифмын үе шатанд цуглуулж, дараа нь рН 7.1 (өөрчлөгдсөн TYI-S-33) бүхий капсулжуулалтыг өдөөгч бодисоор 1 × 106 трофозоит/мл эцсийн концентрацид шингэлсэн.цөсний концентраци 0.05% дунд).Трофозоитуудыг логарифмын өсөлтийн үе хүртэл 37°С-т агааргүй нөхцөлд өсгөвөрлөв.Орчуулагчийг цист үүсгэгч орчин (рН 7.8; цөсний 1%-ийн агууламжтай өөрчлөгдсөн TYI-S-33 орчин) болон G. duodenalis өсгөвөрт 37°С-т 48-96 цагийн турш өөрчлөх ба энэ хугацаанд цист үүсэхийг микроскопоор ажиглав.Ихэнх трофозоитуудыг уйланхай үүсгэсний дараа өсгөвөрийн хольцыг цуглуулж, үлдсэн трофозоитуудыг задлахын тулд ариутгасан ионгүйжүүлсэн усанд дахин түдгэлзүүлэв.Цистийг тоолж, хулганад ходоодны хоолойгоор дамжуулан дараагийн шинжилгээнд зориулж 4 хэмд хадгалсан.
Giardia эсийн гаднах цэврүү (GEVs) нь өмнө тайлбарласны дагуу баяжуулсан [13].Логарифмын өсөлтийн үе шатанд байгаа трофозоитуудыг экзосомын хомсдолтой FBS (Biological Industries, Beit-Haemek, Израиль) бэлтгэсэн өөрчлөгдсөн TYI-S-33 орчинд 1 × 106 шимэгч хорхой/мл эцсийн концентраци хүртэл дахин түдгэлзүүлж, 12 цагийн турш өсгөвөрлөв.2000 г-т 10 минут, 10,000 г-д 45 минут, 100,000 г-д 60 минутын турш центрифуг хийх замаар өсгөвөрийн дээд давхаргаас тусгаарлав.Тунадасыг фосфатын буфержүүлсэн давсны уусмалд (PBS) уусгаж, BCA уургийн шинжилгээний иж бүрдэл (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, АНУ) ашиглан хэмжигдэхүүнийг тодорхойлж, -80°С хэмд хадгалсан эсвэл цаашдын шинжилгээнд шууд ашигласан.
Хулганы хэвлийн хөндийн анхдагч макрофагуудыг өмнө нь тайлбарласны дагуу бэлтгэсэн [24].Товчхондоо, хулгана (6-8 долоо хоногтой) 2.5 мл 2.98%-ийн Difco шингэн тиогликолын орчин (BD, Franklin Lakes, NJ, USA) -ийг хэвлийд (хэвлийн дотуур [ip]) тарьж, 3-4 тагнайгаар тэжээсэн.Эвтаназийн дараа хулганын хэвлийн хөндийгөөс макрофагуудын суспензийг цуглуулж, 1000 г-т 10 минутын турш 3 удаа центрифуг хийсэн.Ургац хураасан эсийг CD11b тэмдэглэгээг ашиглан эсийн цэвэршилт >98% болтол нь илрүүлж, дараа нь 6 цооногийн эсийн өсгөвөрлөлтийн ялтсуудад (4.5 x 106 эс/худ) нэмж, 10% FBS (Bioindustry) 37°C-т өсгөвөрлөсөн.ба 5% CO2.
1 мл ТРИзол урвалж (Vazyme, Нанжин, Хятад) дахь 1 × 107 трофозоитоос РНХ гаргаж авч, нийт G. duodenalis РНХ-аас MonScript dsDNase (Монад, Вухан, Хятад) ашиглан геномын ДНХ гаргаж, нэмэлт ДНХ (cDNA) нийлэгжүүлсэн. үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу MonScript RTIIII Super Mix (Monad) ашиглан.
Зорилтот G. duodenalis генийн CDS дарааллын мэдээллийг NCBI GenBank-аас авсан.Зорилтот ген тус бүрт тусгайлан үл үзэгдэх клончлох праймерыг зохион бүтээхийн тулд Primer 5.0 ашиглана уу.Урагшаа праймер (5′-3′) гурван хэсгээс бүрдэнэ: шугаманжуулсан вектор pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) ба ATG болон GNN эхлэл кодонтой давхцсан дараалал (хэрэв эхний суурь нь G биш бол).Энэ нь илэрхийллийн үр ашгийг дээшлүүлэхийн тулд хийгддэг.Үүнээс гадна дор хаяж 16 bp хосолсон суурь (GC агууламж 40-60% / Tm ойролцоогоор 55 ° C).Урвуу праймер (5′-3′) нь EcoRV-шугаманжуулсан вектор pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT)-тай давхцах дараалал, дор хаяж 16 bp-ийн хосолсон суурь гэсэн хоёр хэсгээс бүрдэнэ.(сүүлийн хоёр зогсоолыг эс тооцвол).суурь) рекомбинант плазмидууд шошготой уургаа илэрхийлэх боломжийг олгох AA эсвэл GA зэрэг кодон).Праймерын дарааллыг 1-р хүснэгтэд жагсаасан бөгөөд Кангмет Биотехнологи ХХК (Чанчунь, Хятад) нийлэгжүүлсэн.
Загвар болгон бэлтгэсэн G. duodenalis cDNA-г ашиглан Pfu ДНХ полимераза (Тянген, Бээжин, Хятад) эсвэл Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, China) ашиглан зорилтот үзүүлэлтүүдийг олшруулсан.pcDNA3.1(+) эукариот экспрессийн вектор плазмидыг EcoRV хязгаарлах ферментээр шугаман болгож, Fast AP (Thermo Fisher Scientific) ашиглан фосфоргүйжүүлсэн.Шугаманжуулсан pcDNA3.1(+) хэсгүүд болон олшруулсан зорилтот генийн хэсгүүдийг ДНХ гель цэвэршүүлэх хэрэгсэл (Тянген) ашиглан цэвэршүүлж, Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific) ашиглан хэмжигдэхүүнийг тодорхойлсон.pcDNA3.1(+) фрагмент болон зорилтот генийн фрагмент бүрийг MonClone нэг угсралтын клончлолын холимог (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, China) ашиглан дахин нэгтгэж, Comate Bioscience Company Limited (Чанчун, Хятад) ашиглан ДНХ-ийн дарааллаар баталгаажуулсан..
Endotoxin агуулаагүй pcDNA3.1(+)-alpha-2 ба pcDNA3.1(+)-alpha-7.3-ийг SanPrep Endotoxin-free Plasmid Mini Kit (Sangon Biotech) ашиглан үүсгэсэн.Элюцийн буфер дэх EDTA нь трансфекцийн шинжилгээнд саад учруулахгүй байхын тулд концентрацийг 500 нг/мкл-ээс дээш түвшинд байлгасан.Хулганы хэвлийн хөндийн анхдагч макрофагуудыг RPMI 1640 (Biological Industries) иж бүрэн тэжээлт орчинтой 6 цооногийн ялтсанд 12 цагийн турш өсгөвөрлөж, дараа нь эсийг бүлээн PBS-д 3 удаа угааж, пенициллин, стрептомициныг зайлуулж, дараа нь бүрэн тэжээлт орчинд дүүргэсэн.Эндотоксин агуулаагүй pcDNA3.1(+)-alpha-2 ба pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 мкг) плазмидуудыг Opti-MEM бууруулсан ийлдсийн орчинд (Gibco, Thermo Fisher Scientific) 125 мкл шингэлэв..Дараа нь 5 мкл Lipofectamine 2000 трансфекцияны урвалжийг (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) 125 мкл бага сийвэнгийн Opti-MEM орчинд шингэлэв.Шингэрүүлсэн эндотоксингүй плазмидыг Lipofectamine 2000-тай хольж, холимгийг тасалгааны температурт 5 минут байлгаснаар липосом-ДНХ-ийн цогцолборыг бэлтгэнэ.Цогцолборуудыг худаг бүрийн эсүүдэд тусад нь шилжүүлж, аажмаар холино.4 цагийн дараа эсийн өсгөвөрлөгчийг 2 мл бүрэн RPMI 1640 тэжээлээр сольж, өсгөвөрлөлтийг 24 цагийн турш үргэлжлүүлэв.Шинэ эсийн өсгөвөрлөгчийг эсүүдэд нэмж, шинжилгээний загвараас хамааран янз бүрийн хугацаанд өсгөвөрлөсөн.
Супернатантууд болон эсийн лизатаас уургийн дээжийг өмнө нь тайлбарласны дагуу бэлтгэсэн [25].Pro-IL-1β, pro-caspase-1, caspase-1 p20, NLRP3, β-актин, His-tag-ийн мембран дамжуулах параметрүүд нь 200 мА/90 мин байв.Интерлейкин 1β (IL-1β; R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, АНУ), каспаза-1 (p20) (Adipogen, Швейцарь) болон NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, Швейцарь) болон 1:5000-д зориулагдсан Түүний S tagenci (Amtifilet) Вухан, Хятад) болон β-актин (Proteintech, Вухан, Хятад).
Дискцинимидын суберат (DSS) -тэй хөндлөн холбоосыг өмнө нь тайлбарласны дагуу гүйцэтгэсэн [26].Эсүүдийг хүйтэн PBS-ээр 3 удаа угааж, 25 мМ Na2PO4, 187.5 мм NaCl, 25 мм HEPES, 125 мм NaHCO3 агуулсан 50 мкл ASC урвалын буферт (рН 8.0) 27 хэмжигч зүүгээр бүрэн задалсан.Хольцыг 5000 г-т 3 минутын турш центрифуг хийж, үрлэнг 10 мкл DSS (DMSO-д 25 мМ) болон 40 мкл ASC урвалын буферээр 30 минутын турш 37 градусын турш оёв.5000 г-т 10 минутын турш центрифуг хийсний дараа үрэлийг 40 мкл ASC урвалын буфер ба 10 мкл 6х уураг ачаалах буфер (ТрансГен, Бээжин, Хятад) уусмалд уусгасны дараа уусмалыг өрөөний температурт 15 цагийн турш унтраасан. мин., Дараа нь 10 минут буцалгана.Дараа нь уургийн дээжийг 1:500 шингэрүүлэлтийн харьцаагаар ASC-ийн эсрэг анхдагч эсрэгбие (Wanleibio, Shenyang, China) ашиглан Western blotting хийсэн.
Өмнө нь тайлбарласан процедурын дараа [13], эсийн өсгөвөрийн супернатантуудыг цуглуулж, хулганы IL-1 Beta ELISA иж бүрдэл (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) ашиглан үрэвслийн эсрэг цитокины IL-1β-ийн шүүрлийг тодорхойлсон.IL-1β стандарт муруйг ашиглан OD450nm утгыг уургийн концентрацид хөрвүүлнэ.
Бүрхүүл дээр бүрсэн эсүүдийг бүлээн PBS-д 3 удаа зөөлөн угааж, эд эсийн тогтоогч (Biosharp, Бээжин, Хятад) тасалгааны температурт (RT) 10 минутын турш, 0.1% Triton X-Permeabilize 100 (PBS; Biosharp-д шингэлнэ) -д сайтар угаана. ) тасалгааны температурт 20 минутын турш, тасалгааны температурт 2 цагийн турш үхрийн сийвэнгийн 5% альбумин (PBS-д) -д блокло.Дараа нь эсүүдийг ASC (1:100 шингэрүүлэлт) эсвэл NLRP3 (1:100 шингэрүүлэлт) болон Cy3 шошготой ямааны эсрэг IgG(H+L) (1:400; EarthOx)-ын эсрэг анхдагч эсрэгбие бүхий 4°С-т шөнийн турш өсгөвөрлөсөн. , Сан Франциско, Калифорниа, АНУ) эсвэл FITC-тэй холбосон ямааны эсрэг хулгана IgG (1:400; Earthox) 37°С-т харанхуйд 1 цаг байлгана.Бөөмүүдийг Hoechst 33258 (10 мкг/мл; UE, Suzhou, China) -аар 5 минутын турш будаж, флюресценцийн микроскопоор (Olympus Corporation, Токио, Япон) ажиглав.
Хулгануудыг дөрвөн бүлэгт хуваасан (бүлэг тус бүрт n = 7): (i) PBS-ээр эмчилсэн сөрөг хяналтын бүлэг (зөвхөн PBS; 100 мкл/хулганы PBS-ээр гаваж хийж, дараа нь 3 цагийн дараа өдөр бүр 100 мкл/хулганы хэвлийн хөндийд тарина)., 7 хоногийн турш тасралтгүй);(ii) сөрөг хяналтын бүлэгт MCC950 дарангуйлагчаар эмчилсэн [27] (100 мкл/хулганыг PBS-ээр дамжуулан, 3 цагийн дараа, 10 мг/кг биеийн жин [BW] MCC950 [PBS-д] өдөр бүр хэвлийн хөндийд, үргэлжлэх хугацаа 7 хоног);(iii) G. duodenalis цистийн халдварын бүлэг (1.5 x 106 уйланхай/хулгана, 3 цагийн дараа, 100 мкл/хулганы PBS-ийг өдөр бүр 7 хоногийн турш хэвлийн хөндийд тарина);(iv) G. duodenalis уйланхай хавсарсан халдварын бүлгийн MCC950 дарангуйлагч эмчилгээний бүлэг (1.5×106 уйланхай/хулгана, 10мг/кг биеийн жин MCC950 өдөр бүр хэвлийд 7 хоногийн турш 3 цаг).Хулгана бүрийн биеийн жинг өдөр бүр хянаж, 7 дахь өдөр бүх хулганыг устгасан.Хурааж авсан арван хоёр нугалаа (3 см урт) 1 мл PBS-д жижиг хэсгүүдэд хувааж, уйланхайг 4 градусын температурт PBS-т шөнийн турш устгаж, G. duodenalis trophozoites.Шинэ арван хоёр нугалаа (1 см урт) гематоксилин ба эозин (H&E) будалтанд зориулж тусгаарласан.
Хулганыг хоёр бүлэгт хуваасан: (i) MOCK хяналтын бүлэг ба (ii) MCC950 дарангуйлагч бүлэг.Бүлэг тус бүрт таван эмчилгээ (n = 7/эмчилгээний бүлэг): (i) PBS эмчилгээний сөрөг хяналтын бүлэг (зөвхөн PBS; 100 мкл/хулганы PBS, булчинд (IM) тарилга (tibialis anterior) [28, 29] ;( ii) pcDNA3.1(+) плазмидын сөрөг хяналтын бүлэг (100 мкг/хулганы ДНХ, булчинд тарих замаар (iii) G. duodenalis цистийн халдварын эерэг хяналтын бүлэг (1.5 x 106 цист/хулгана, гаважаар) (iv) a pcDNA3.1(+)-альфа-2 (100 мкг/хулганы ДНХ, булчинд тарих замаар) болон (v) pcDNA3.1(+)-альфа-7.3 (100 мкг/хулгана) плазмидын эмчилсэн бүлэг ДНХ-ийг 12 цагийн турш дамжсаны дараа MCC950 дарангуйлагч бүлгийн хулгануудад 7 хоногийн турш MCC950 (биеийн жинд 10 мг/кг) өдөр бүр хэвлийн хөндийн тарилга хийсэн бол MOCK бүлгийн хулгануудад PBS-ийн эмчилгээг тэнцүү хэмжээгээр авсан. Цусны дээжийг авсан. нүдний алимны хулганаас цуглуулж, 4 ° C-т шөнийн турш үлдээсэн ийлдсийн дээжийг IL-1β-ийн түвшинг тодорхойлохын тулд ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээ (ELISA) ашиглан тусгаарлав.
Гучин таван хулганыг таван бүлэгт хуваасан (n=7/бүлэг).1-р бүлэг нь PBS-ээр эмчилсэн сөрөг хяналтын бүлэг байсан: хулгана 100 мкл PBS-ийг булчинд, 3 хоногийн дараа гуурсан хоолойгоор хийсэн.2-р бүлэг нь G. duodenalis цистийн халдвартай эерэг хяналтын бүлэг юм: хулганад 100 мкл PBS тарьж, 3 хоногийн дараа 1.5 x 106 уйланхай/хулганыг ходоодонд тарьсан.Гуравдугаар бүлэг – 12 нугалаа гэдэсний цистийн халдварын хяналтын бүлэгтэй хавсарч pcDNA3.1(+) бүхий плазмидын дархлаажуулалт: хулгануудад 100 мкг плазмидын ДНХ pcDNA3.1(+)(im) амаар, 1.5×106 цист/хулгана 3 хэд хэдэн удаа уусан байна. өдрүүд.4 ба 5-р бүлгүүдэд G. duodenalis цистийн халдвартай хавсарсан рекомбинант pcDNA3.1(+)-альфа-2 гиардин плазмид эсвэл pcDNA3.1(+)-альфа-7.3 гиардин плазмид байв.Туршилтын бүлэг: хулгана 100 мкг pcDNA3 хүлээн авсан.1(+)-гиардин плазмидын ДНХ (im), дараа нь 3 хоногийн дараа 1.5 × 106 уйланхай/хулганыг хоолойгоор тарьсан.Гуурсан хоолойгоор дамжуулан G. duodenalis цистийг нэвтрүүлсний дараа хулгана бүрийн биеийн жинг хянаж байсан.Паразитийн ачааллыг хэмжих, HE будалтын шинжилгээнд зориулж шинэ арван хоёр нугалаа цуглуулсан.
Гистологийн өөрчлөлтийг өмнө нь хэвлэгдсэн журмын дагуу шинжилсэн [30].Шинэ арван хоёр нугасыг эдийн эс тогтоогчоор бэхэлж, парафинд шингээж, 4 мкм-ээр зүсэж, H&E-ээр будаж, гэрлийн микроскопоор шинжлэв.Бие даасан долоон хулганаас долоон эдэд гарсан эмгэг өөрчлөлтийг эмчилгээний талаар мэдээгүй эмгэг судлаач үнэлж, 200 дахин томруулж авсан.Виллигийн урт ба криптын гүнийг өмнө нь тайлбарласан аргуудын дагуу хэмжсэн.
Үр дүнг in vitro болон in vivo гурав дахин авсан.Графикуудыг GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, АНУ) ашиглан үүсгэсэн.Хоёр бүлгийн ялгааг t-тестээр, харин ≥3 бүлгийн ялгааг SPSS программ хангамж (22.0 хувилбар; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, АНУ) ашиглан нэг талын дисперсийн шинжилгээ (ANOVA) ашиглан шинжилсэн.Өгөгдлийг Левенийн тест, дараа нь Бонферронигийн дараах тест (B) ашиглан дисперсийн нэгэн төрлийн байдалд дүн шинжилгээ хийсэн.Ач холбогдол нь P<0.05, P<0.01, P<0.001 (чухал биш [ns]) (P>0.05) гэж илэрхийлэгддэг.
Киотогийн ген ба геномын нэвтэрхий толь (KEGG) дахь GEV протеомикийн талаарх бидний өмнөх дүн шинжилгээ нь үрэвслийн дохионы замыг идэвхжүүлэхэд олон зорилтот бодисууд оролцож болохыг харуулсан [13].Бид альфа-2 ба альфа-7.3 гиардин гэсэн хоёр ирээдүйтэй зорилтыг сонгож, эдгээр молекулуудыг олшруулж, pcDNA3.1(+) эукариот экспрессийн векторыг бүтээхэд ашигласан.Дараалалд оруулсны дараа рекомбинант pcDNA3.1(+)-альфа-2 ба альфа-7.3 гиардин экспрессицийн плазмидуудыг хулганы хэвлийн анхдагч макрофаг руу шилжүүлж, үрэвслийн каспас-1 p20 шинж тэмдэг бүхий уураг (идэвхжүүлсэн каспаз-1-ийн хэсэг) тодорхойлсон. үрэвслийг өдөөж болох гол молекулуудыг тодруулах.Үр дүн нь альфа-2 ба альфа-7.3 гиардинууд нь GEV-тэй төстэй p20 каспаза-1 илэрхийлэлийг өдөөж болохыг харуулсан.Цэвэрлэгдээгүй сөрөг хяналт (зөвхөн PBS) ба плазмидын хяналтын pcDNA3.1(+)-д каспаза-1 идэвхжилд ямар ч нөлөө үзүүлээгүй (Зураг 1).
pcDNA3.1(+)-альфа-2 ба альфа-7.3 гиардинуудаар p20 каспас-1 идэвхжүүлэлтийг хэмжих.Рекомбинант эукариот экспрессийн плазмидууд pcDNA3.1(+)-альфа-2 ба альфа-7.3 ямарднууд (эгнээ тус бүрийн дээр) хулганы хэвлийн анхдагч макрофаг руу нэвчиж, 24 цагийн дараа өсгөвөрийн супернатантуудыг хураан авсан.Western blotting нь каспаза-1 p20 үрэвслийн уургийн илэрхийлэлийн түвшинг хэмжихэд хэрэглэгддэг.Зөвхөн PBS-ийн эмчилгээний бүлгийг (C эгнээ) ба pcDNA3.1(+) монотерапийн бүлгийг (pcDNA3.1 эгнээ) сөрөг хяналт болгон, GEV эмчилгээний бүлгийг эерэг хяналт болгон ашигласан.Рекомбинант уургийн илэрхийлэл нь уураг тус бүрээс гистидиний шошгыг илрүүлснээр батлагдсан бөгөөд хүлээгдэж буй уургийн зурвас нь альфа-2 гиардин (38.2 кДа) ба альфа-7.3 гиардин (37.2 кДа) байв.GEV, Giardia duodenum Extracellular vesicles, pcDNA3.1(+), EcoRV-linearized vector, SUP, supernatant
Альфа-2 гиардин ба альфа-7.3 гиардин нь p20 каспаза-1-ийн илэрхийлэлийг өдөөж, NLRP3-ийн үрэвслийн хариу урвал болох pcDNA3.1(+)-альфа-2 гиардин ба pcDNA3.1(+)-альфа-г идэвхжүүлэх үүрэг гүйцэтгэдэг эсэхийг тодорхойлохын тулд -7.3 гиардиныг рекомбинант плазмидын ДНХ бүхий хулганы хэвлийн хөндийн анхдагч макрофаг руу шилжүүлж, үрэвслийн гол уургууд болох NLRP3-ийн илэрхийлэл, нутагшуулах, олигомержих түвшинг тодорхойлсон.Энэ туршилтанд GEV-ийг эерэг хяналтын бүлэг болгон ашигласан бөгөөд эмчилгээгүй бүлэг (зөвхөн PBS) эсвэл pcDNA3.1(+) трансфекцийн эмчилгээний бүлэг сөрөг бүлэг байв.Үр дүн нь GEV бүлгийн нэгэн адил гиардин pcDNA3.1(+)-альфа-2 ба гиардин pcDNA3.1(+)-альфа-7.3-ийн рекомбинант плазмид ДНХ нь NLRP3, pro-IL-1β болон procaspase-1 болон caspase-1 идэвхжүүлэлт (Зураг 2a).Нэмж дурдахад, гиардин хоёулаа мэдэгдэхүйц IL-1β-ийн шүүрлийг өдөөдөг (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; альфа-2 гиардин: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.00 ).;альфа-7.3 гиардин: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (Зураг 2б).Ихэнх ASC уургууд нь pcDNA3.1(+)-alpha-2 эсвэл pcDNA3.1(+)-alpha-тай харьцуулахад pcDNA3.1(+) плазмидаар дамжсан эмчилгээгүй бүлэг эсвэл эмчилгээний бүлэгт мономер байсан. 7.3 гиардин.ASC олигомержилт нь GEV эерэг хяналтын бүлэг эсвэл бүлгийн рекомбинант плазмидын ДНХ-д тохиолдож, олигомер хэлбэрийг харуулсан (Зураг 2c).Эдгээр урьдчилсан мэдээллээр альфа-2 гиардин ба альфа-7,3 гиардин нь NLRP3-ийн үрэвслийн идэвхжлийг өдөөж болохыг харуулж байна.ASC ба NLRP3-ийн нутагшуулалтын дараагийн иммунофлуоресцент судалгаагаар сөрөг хяналтын бүлэгт ASC уураг нь цитоплазм даяар тархаж, pcDNA3.1(+)-альфа-2-ыг гиардин эсвэл pcDNA3-аар өдөөх үед цэгийн дохио хэлбэрээр гарч ирснийг харуулсан.1(+)-альфа-7,3 гиардин бүлэг эсвэл GEV эерэг хяналтын бүлэг (Зураг 2d).Сөрөг хяналт ба плазмидаар эмчилсэн pcDNA 3.1 бүлгүүдэд NLRP3 уургийн дохио илрээгүй бол флюресцент дохио нь pcDNA3.1(+)-альфа-2 гиардин эсвэл pcDNA3.1(+)-альфа-7.3-д хариу өгөх цэг болсон. илэрсэн байна..гиардин нь цитоплазмд эсвэл HEV-ийг өдөөх үед олддог (Зураг 2e).Эдгээр өгөгдөл нь G. duodenalis giardin alpha-2 ба giardin alpha-7.3 нь хулганы анхдагч хэвлийн макрофаг дахь NLRP3 үрэвсэлийг идэвхжүүлдэг болохыг харуулж байна.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin болон pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin нь хулганы хэвлийн макрофаг дахь NLRP3 үрэвсэлийг идэвхжүүлдэг.Рекомбинант эукариот экспрессийн плазмид pcDNA3.1(+)-альфа-2 гиардин ба pcDNA3.1(+)-альфа-7.3 гиардиныг хулганын хэвлийн хөндийн анхдагч макрофаг ба эсүүдэд шилжүүлэн суулгах, эсхүл экспресс, олигомержилтын шинжилгээнд зориулж дээд давхаргыг 24 цагийн дотор хураан авах. , шүүрэл.үрэвслийн гол уургийг нутагшуулах.Зөвхөн PBS (C) бүлэг ба pcDNA3.1(+) дан эмчилгээний бүлгийг сөрөг хяналт болгон, GEV эмчилгээний бүлгийг эерэг бүлэг болгон ашигласан.a NLRP3, pro-IL-1β, pro-caspase-1, p20 caspase-1 зэрэг үрэвслийн гол уургууд болох NLRP3-ийг Western blotting-ээр илрүүлсэн.b Супернатант дахь IL-1β-ийн шүүрлийн түвшинг ферменттэй холбоотой иммуносорбентын шинжилгээ (ELISA) ашиглан тодорхойлсон.Хяналтын болон туршилтын бүлгүүдийн ялгааг SPSS программын 22.0 хувилбарыг ашиглан нэг талын дисперсийн шинжилгээ (ANOVA) аргаар шинжлэв.Од тэмдэг нь **P<0.01 ба ***P<0.001 бүлгүүдийн хооронд мэдэгдэхүйц ялгаа байгааг харуулж байна.c Үрлэн дэх ASC олигомержих түвшинг DSS хөндлөн холбоосын шинжилгээгээр тодорхойлсон бол эсийн лизат дахь ASC түвшинг ачааллын хяналт болгон ашигласан.d Иммунофлуоресценц ашиглан ISC-ийн нутагшуулалтын дүрслэл.e NLRP3-ийн нутагшуулалтыг харуулахын тулд иммунофлуоресценцийг ашигласан.ASC, апоптозын толботой төстэй уураг;IL, интерлейкин;NLRP3, нуклеотид-холбогч олигомержилт төст рецептор 3;ns, ач холбогдолгүй (P > 0.05)
G. duodenalis болон түүний ялгаруулдаг GEVs хоёулаа NLRP3 үрэвслийг идэвхжүүлж, in vitro-ийн эзний үрэвслийн хариу урвалыг зохицуулдаг.Тиймээс G. duodenalis-ийн эмгэг төрүүлэхэд NLRP3 үрэвслийн үүрэг тодорхойгүй хэвээр байна.Энэ асуудлыг судлахын тулд бид G. duodenalis цистийн халдвартай хулганууд болон G. duodenalis цист + MCC950 дарангуйлагч эмчилгээний халдвартай хулгануудын хооронд туршилт хийж, G. duodenalis цистээр халдварласан үед NLRP3 үрэвслийн илрэлийг харьцуулсан.Туршилтын нарийвчилсан схемийг 3a-р зурагт үзүүлэв.Эмчилгээний янз бүрийн бүлгийн хулгануудын биеийн жингийн өөрчлөлтийг уйланхайгаар халдварласны дараа 7 хоногийн турш хянаж, үр дүнг Зураг 3б-д үзүүлэв.Цэвэр PBS-ээр эмчилсэн бүлэгтэй харьцуулахад үр дүн нь (i) G. duodenalis цистээр халдварлагдсан хулганын биеийн жин халдвар авснаас хойш 3 дахь өдрөөс 7 дахь өдөр хүртэл буурсан;(ii) MCC950 дарангуйлагчтай эмчилгээ нь хулганын биеийн жинд мэдэгдэхүйц нөлөө үзүүлээгүй..Ганц халдварын бүлэгтэй харьцуулахад MCC950-ээр эмчилсэн 12 хуруу гэдэсний халдварын бүлгийн BW янз бүрийн хэмжээгээр буурсан (1 дэх өдөр: ANOVA, F(3, 24) = 1.885, P = 0.0148; 2 дахь өдөр: ANOVA, F( 3, 24) ) = 0.4602, P<0.0001 3-р өдөр: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010: ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052, NO: NO (3, 24)=0,6497, P=0,0645; 6 дахь өдөр: ANOVA, F(3, 24)=5,457, P=0,0175; 7 дахь өдөр: ANOVA, F(3, 24) = 2,893, P = 0,0202).Эдгээр өгөгдөл нь NLRP3 үрэвсэл нь арван хоёр гэдэсний халдварын эхний үе шатанд (2-4 хоног) хулганыг жин хасахаас хамгаалдаг болохыг харуулж байна.Дараа нь бид арван хоёр нугалаа угаах шингэнд G. duodenalis trophozoites илрүүлэхийг зорьсон бөгөөд үр дүнг Зураг 3в-д үзүүлэв.G. duodenalis цистийн халдварын бүлэгтэй харьцуулахад NLRP3 үрэвсэлийг (t(12) = 2.902, P = 0.0133) хаасны дараа арванхоёрдугаар гэдэсний трофозоитын тоо мэдэгдэхүйц нэмэгдсэн.HE-ээр будсан арван хоёр нугасны эдийг зөвхөн PBS болон MCC950-ээр эмчилсэн сөрөг хяналттай харьцуулахад: (i) G. duodenalis цистийн халдвар нь арван хоёр нугасны хавтсыг гэмтээж (ANOVA, F(3, 24)=0.4903, P= 0.0488) ) ба крипт хатингаршил (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) G. duodenalis уйланхайгаар халдварласан, MCC950 дарангуйлагчаар эмчилсэн хулганаас 12 хуруу гэдэс.арван хоёр нугасны хавтсууд гэмтсэн, үхсэн (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) хатингаршил, криптийн салаалсан (ANOVA, F (3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (Зураг 3d-). е) .Эдгээр үр дүн нь NLRP3 үрэвсэл нь G. duodenalis-ийн эмгэг төрүүлэгчийг бууруулахад чухал үүрэг гүйцэтгэдэг болохыг харуулж байна.
Giardia арван хоёр нугасны халдварт NLRP3 үрэвслийн үүрэг.Хулганыг гаваажинд (iv) арванходенококкийн уйланхайгаар хагалж, дараа нь MCC950 (ip) -тэй эсвэл хийгээгүй эмчилсэн.PBS эсвэл MCC950 бүхий дан эмчилгээний бүлгийг хяналт болгон ашигласан.Туршилтын бүлэг ба эмчилгээний горим.b Төрөл бүрийн эмчилгээний бүлэг тус бүрийн хулганын биеийн жинг 7 хоногийн турш хянаж байсан.G. duodenalis халдварын бүлэг ба G. duodenalis + MCC950 халдварын эмчилгээний бүлгийн ялгааг SPSS программын 22.0 хувилбарыг ашиглан t-тестээр шинжлэв.Од тэмдэг нь *P<0.05, **P<0.01, эсвэл ***P<0.001-д мэдэгдэхүйц ялгаа байгааг харуулж байна.c Паразитийн ачааллыг 12 хуруу гэдэс угаах шингэн дэх трофозоитын тоог тоолох замаар тодорхойлно.G. duodenalis халдварын бүлэг ба G. duodenalis + MCC950 халдварын эмчилгээний бүлгийн ялгааг SPSS программын 22.0 хувилбарыг ашиглан t-тестээр шинжлэв.Од тэмдэг нь *P <0.05-д мэдэгдэхүйц ялгаа байгааг харуулж байна.d 12 хуруу гэдэсний гистологийн гематоксилин ба эозин (H&E) будгийн үр дүн.Улаан сумнууд нь виллийг гэмтээж байгааг, ногоон сум нь криптийг гэмтээж байгааг илтгэнэ.Хэмжээний талбар: 100 микрон.e, f 12 нугалаа гэдэсний хилэнгийн өндөр ба хулганы криптийн өндрийн статистик шинжилгээ.Од тэмдэг нь *P<0.05 ба **P<0.01 дээр мэдэгдэхүйц ялгаа байгааг харуулж байна.Үр дүнг бие даасан 7 биологийн туршилтаас авсан.BW, биеийн жин;ig, ходоодонд хүргэх зам;ip, хэвлийн доторх хүргэх зам;ns, чухал биш (P > 0.05);PBS, фосфатын буфержуулсан давсны уусмал;WT, зэрлэг төрөл
IL-1β-ийн шүүрэл нь үрэвслийг идэвхжүүлэх шинж тэмдэг юм.G. duodenalis alpha-2 giardine болон alpha-7.3 giardine нь in vivo NLRP3 хостын үрэвсэлийг идэвхжүүлж байгаа эсэхийг тодорхойлохын тулд бид эмчилгээ хийлгээгүй WT хулгана (хуурамч бүлэг) болон NLRP3 үрэвслийн эсрэг блоклогдсон хулгана (MCC950 дарангуйлагдсан эмчилгээний бүлэг) ашигласан.Туршилтын нарийвчилсан схемийг Зураг 4а-д үзүүлэв.Туршилтын бүлгүүд нь PBS, G. duodenalis цистийг гаваажаар эмчлэх, pcDNA3.1-ийг булчинд тарих, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine эсвэл pcDNA3.1-alpha-7.3 гиардиныг булчинд тарих зэрэг хулгануудаас бүрдсэн.Рекомбинант плазмидыг булчинд тарьсны дараа 7 дахь өдөр ийлдсийг цуглуулж, бүлэг тус бүрийн IL-1β-ийн түвшинг тогтоов.Зураг 4б-д үзүүлснээр MOCK бүлэгт: (i) PBS бүлэгтэй харьцуулахад pcDNA3.1 эмчилгээ нь IL-1β шүүрэлд мэдэгдэхүйц нөлөө үзүүлээгүй (ANOVA, F(4.29)=4.062, P=0.9998), гэхдээ G. duodenalis цистийн бүлэгт (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine болон pcDNA3-д IL-β-ийн шүүрэл мэдэгдэхүйц нэмэгдсэн байна.1- Альфа-7.3 гиардиныг булчинд тарих нь ийлдэс дэх IL-1β-ийн түвшинг мэдэгдэхүйц нэмэгдүүлсэн (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P<0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 гиардин нь pcDNA3.1-alpha-2 гиардиныг булчинд тарих бүлэгт IL-1β шүүрлийн өндөр түвшинг өдөөдөг (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.033) .MCC950 эмчилгээний бүлэг болон MOCK бүлгийн бүлэг тус бүртэй харьцуулбал: (i) PBS хяналтын бүлэг болон pcDNA3.1 хяналтын бүлгийн IL-1β шүүрлийн түвшин MCC950 дарангуйлагчийг блоклосны дараа тодорхой хэмжээгээр буурсан боловч ялгаа нь тийм биш юм. ач холбогдолтой (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) MCC950-г блоклосны дараа., G. duodenalis цистийн халдвартай бүлэг, pcDNA3.1-alpha-2 гиардины бүлэг, pcDNA3.1-alpha-7.3 гиардины бүлэгт (G. duodenalis: ANOVA, F(9) IL-1β-ийн шүүрэл мэдэгдэхүйц буурсан байна. , 58) = 3.540 , P = 0.0120 pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.0447 pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANO8; ) = 3.540, P = 0.0164).Эдгээр үр дүн нь альфа-2 гиардин ба альфа-7.3 гиардин нь in vivo NLRP3 үрэвслийн идэвхжлийг идэвхжүүлдэг болохыг харуулж байна.
pcDNA3.1(+)-гиардинууд нь in vivo NLRP3 хостын үрэвсэлийг идэвхжүүлдэг.Хулганыг рекомбинант эукариот экспрессийн плазмид pcDNA3.1(+)-альфа-2 гиардин эсвэл pcDNA3.1(+)-альфа-7.3 гиардинаар дархлаажуулж (IM) дараа нь MCC950 (ip; MCC950 бүлэг) эсвэл үгүй ​​(дамми бүлэг) -ээр эмчилсэн. ).PBS буюу pcDNA3.1(+) плазмидын эмчилгээний бүлгийг сөрөг хяналт болгон, G. duodenalis цистийн эмчилгээний бүлгийг эерэг хяналт болгон ашигласан.Туршилтын бүлэг ба эмчилгээний горим.b Хулганы ийлдэс дэх IL-1β-ийн түвшинг 7 дахь өдөр ELISA шинжилгээгээр хэмжсэн.MOCK бүлгийн бүлгүүдийн ялгааг нэг талын ANOVA ашиглан, MOCK бүлэг болон MCC950 бүлгийн хоорондох ялгааг SPSS програм хангамжийн 22.0 хувилбарын t-тест ашиглан шинжилсэн.Од тэмдэг нь MOCK бүлгийн эмчилгээний бүлгүүдийн хооронд мэдэгдэхүйц ялгаа байгааг харуулж байна, *P<0.05 ба ***P<0.001;долларын тэмдэг ($) нь MOCK бүлэг болон MCC950 бүлгийн P<0.05 дахь бүлэг тус бүрийн хооронд мэдэгдэхүйц ялгаа байгааг харуулж байна.Биологийн бие даасан долоон туршилтын үр дүн.i, булчинд тарих, ns, чухал биш (P > 0.05)
G. duodenalis-ийн халдварт NLRP3 хост үрэвслийн альфа-2 ба альфа-7.3 гиардинаар зуучлах нөлөөг судлахын тулд бид WT C57BL/6 хулганыг хэрэглэж, альфа-2 гиардин, альфа-7.3 гиардин тарьсан.плазмидыг булчинд тарьж, 3 хоногийн дараа G. duodenalis цистийн ходоодны хоолойгоор дамжин хулганыг 7 хоногийн турш ажиглав.Туршилтын нарийвчилсан схемийг Зураг 5а-д үзүүлэв.Хулгана бүрийн биеийн жинг өдөр бүр хэмжиж, ходоодны гуурсаар ууснаас хойш 7 дахь өдөр арван хоёр гэдэсний шинэ эдээс дээж авч, трофозоитын тоог хэмжиж, гистопатологийн өөрчлөлтийг ажиглав.Зураг 5b-д үзүүлснээр хооллох хугацаа нэмэгдэхийн хэрээр бүлэг тус бүрийн хулганын BW аажмаар нэмэгджээ.Хулганы MT нь G. duodenalis-ийн уйланхайг ходоодонд оруулснаас хойш 3 дахь өдөр буурч эхэлсэн бөгөөд дараа нь аажмаар нэмэгддэг.Альфа-2 гиардин ба альфа7.3 гиардиныг булчинд тарих замаар өдөөгдсөн NLRP3 үрэвсэл идэвхжсэнээр хулганын жингийн алдагдлыг мэдэгдэхүйц сулруулсан (1 дэх өдөр: pcDNA3.1-альфа-2 гиардин, ANOVA, F(4, 30) = 1. = 0 .9754 1-р өдөр: pcDNA3.1-alpha-7.3 гиардин, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 2 дахь өдөр: pcDNA3.1-alpha-2 гиардин, ANOVA, F( 4, 30) = 0.3172, P = 0.9979 2-р өдөр: pcDNA3.1-alpha-7.3 гиардин, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409 3-р өдөр: pcDNA3.1-alpha-2 NOVA, 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 3 дахь өдөр: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.8222, P = 0.0083 4-р өдөр: pcDNA3.1-alpha; , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, 4-р өдөр: pcDNA3.1-alpha-7.3 гиардин, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P < 0.0001, 5 дахь өдөр: pcDNA3.1-alpha 2 гиардин, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P < 0.0001 5 дахь өдөр: pcDNA3.1-alpha -7.3 гиардин, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P < 0.0001 6 дахь өдөр: pc -DNA альфа-2 гиардин, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, 6 дахь өдөр: pcDNA3.1-альфа-7.3 гиардин, ANOVA, F (4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;7 дахь өдөр: pcDNA3.1-alpha-2 гиардин, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 7 дахь өдөр: pcDNA3.1-alpha-7.3 гиардин, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, <0.0001).Паразитийн ачааллыг 12 хуруу гэдэс дотор үнэлэв (Зураг 5в).Эмчилгээ хийлгээгүй эерэг хяналт болон хоосон pcDNA3.1 вектор тарьсан бүлэгтэй харьцуулахад α-2 гиардин, α-7,3 гиардин (pcDNA3.1-альфа) тарьсан бүлгүүдэд G. duodenalis trophozoites-ийн тоо мэдэгдэхүйц буурсан байна. -2 гиардин: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-альфа-7.3 гиардин: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P<0.0001).Нэмж дурдахад гиардин альфа-7.3 нь гиардин альфа-2-оос илүү хулганад илүү хамгаалалттай байсан (ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0081).HE будалтын үр дүнг Зураг дээр үзүүлэв.5d-f.Альфа-2 гиардин, альфа-7.3 гиардин тарьсан хулгануудад G. duodenalis тарьсан хулганууд болон G. duodenalis-ийг хоосон pcDNA3 вектортой хослуулан тарьсан хулгануудтай харьцуулахад 12 нугасны эд эсийн гэмтэл бага байсан бөгөөд энэ нь хилэнгийн гэмтэлээр илэрдэг.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 эсвэл P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.46 = 0.0028 эсвэл P = 0.0055) ба бууруулсан крипт хатингаршил (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 эсвэл P = 0.0158; pcDNA3.1-alphaine: ANOVA- , F(3, 24) = 1.470, P = 0.0371 эсвэл P = 0.0191).Эдгээр үр дүн нь альфа-2 гиардин ба альфа-7,3 гиардин нь in vivo NLRP3 үрэвсэлийг идэвхжүүлснээр G. duodenalis-ийн халдварыг бууруулдаг болохыг харуулж байна.
G. duodenalis халдварын үед pcDNA3.1(+)-гиардинуудын үүрэг.Хулганыг рекомбинант эукариот экспрессийн плазмид pcDNA3.1(+)-альфа-2 гиардин эсвэл pcDNA3.1(+)-альфа-7.3 гиардинаар дархлаажуулж (IM) дараа нь G. duodenalis уйланхай (ig)-ээр сорьсон.PBS бүлэг болон pcDNA3.1(+) + 12 нугалаа гэдэсний уйланхай эмчилгээний бүлгийг сөрөг хяналтын бүлэг болгон, 12 хуруу гэдэсний уйланхай эмчилгээний бүлгийг эерэг хяналтын бүлэг болгон ашигласан.Туршилтын бүлэг ба эмчилгээний горим.b Төрөл бүрийн эмчилгээний бүлэг тус бүрийн хулгануудын MT-ийг сорилтын дараах 7 хоногийн турш хянаж байсан.Од тэмдэг нь G. duodenalis бүлэг болон pcDNA3.1(+)-альфа-2 гиардин бүлгийн бүлгүүдийн хооронд мэдэгдэхүйц ялгаа байгааг харуулж байна, *P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001;долларын тэмдэг ($) нь G. duodenalis болон pcDNA3.1(+)-альфа-7.3 jardine бүлэг, $$P<0.01 ба $$$P<0.001 бүлэг тус бүрийн хооронд мэдэгдэхүйц ялгаа байгааг харуулж байна.c Паразитийн ачааллыг арван хоёр нугалаа гэдэснээс 1 мл (3 см урт) угаасан трофозоитын тоог тоолж, арван хоёр хуруу гэдэсний нэг см шимэгчийн тоогоор илэрхийлэв.G. duodenalis халдварын бүлэг, pcDNA3.1(+)-альфа-2 гиардины бүлэг, pcDNA3.1(+)-альфа-7.3 гиардины бүлгийн ялгааг SPSS программын 22.0 хувилбарыг ашиглан нэг талын ANOVA шинжилгээгээр шинжлэв.Од тэмдэг нь **P<0.01 ба ***P<0.001-д мэдэгдэхүйц ялгаа байгааг харуулж байна.d 12 хуруу гэдэсний гистологийн өөрчлөлт.Улаан сумнууд нь виллийг гэмтээж байгааг, ногоон сум нь криптийг гэмтээж байгааг илтгэнэ.Хэмжээний талбар: 100 микрон.e, f Хулганы арван хоёр нугасны хилэнгийн өндрийн (e) болон криптийн өндрийн (f) статистик шинжилгээ.Зураг 1d дээрх бүлгүүдийн ялгааг SPSS програм хангамжийн 22.0 хувилбарыг ашиглан нэг талын ANOVA аргаар шинжлэв.Од тэмдэг нь *P<0.05 ба **P<0.01 дээр мэдэгдэхүйц ялгаа байгааг харуулж байна.Биологийн бие даасан долоон туршилтын үр дүн.ns, ач холбогдолгүй (P > 0.05)
Giardia duodenum нь хүний ​​болон бусад хөхтөн амьтдын гэдэсний шимэгч бөгөөд гиардиаз үүсгэдэг.2004 онд ДЭМБ-ын үл тоомсорлож буй өвчлөлийн санаачилгад 6 жилийн хугацаанд, ялангуяа нийгэм, эдийн засгийн түвшин доогуур нийгэмд тархалт ихтэй байсан тул [32] багтсан.Төрөлхийн дархлааны систем нь G. duodenalis халдварын эсрэг дархлааны хариу урвалд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг.Хулганы макрофагууд G. duodenalis-ийг залгиж, эсийн гаднах хавхыг ялгаруулж устгадаг гэж мэдээлсэн [33].Бидний өмнөх судалгаанаас үзэхэд эсийн гаднах шимэгч G. duodenalis нь хулганы макрофаг дахь p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, NLRP3 үрэвслийн дохионы замыг идэвхжүүлж, эзний үрэвслийн хариу урвалыг зохицуулж, суллагдсан GEV нь энэ үйл явцыг сайжруулж болохыг харуулсан.13], 24].Гэсэн хэдий ч GEV-ийн NLRP3 үрэвслийн зохицуулалттай үрэвсэлд оролцдог PAMP-ууд болон лямблиазын үед NLRP3 үрэвслийн гүйцэтгэх үүрэг тодорхойгүй хэвээр байна.Эдгээр хоёр асуултыг тодруулахын тулд бид энэхүү судалгааг хийлээ.
NLRP3 үрэвсэл нь дархлааны эсийн цитоплазмд байрладаг бөгөөд шээсний хүчлийн талст, хорт бодис, бактери, вирус, шимэгч хорхой зэрэг янз бүрийн тоосонцороор идэвхждэг.Бактерийн судалгаагаар хорт бодисууд нь үрэвслийн мэдрэгчийг идэвхжүүлж, үрэвсэл, эсийн үхэлд хүргэдэг гол PAMP гэж тодорхойлсон байдаг [34].Алтан стафилококкийн гемолизин [35] ба гэдэсний савханцар [36], энтеротоксины (NHE) [37] гемолизин BL (HBL) зэрэг бүтцийн хувьд олон янзын хорт бодисууд нь NLRP3 үрэвслийг идэвхжүүлдэг.Вирусын судалгаагаар SARS-COV-2 бүрхүүлийн (E) уураг [38] болон Зика вирусын NS5 уураг [39] зэрэг хоруу чанар бүхий уураг нь NLRP3 рецептороор хүлээн зөвшөөрөгдсөн чухал PAMP-ууд болохыг харуулсан.Шимэгчдийн судалгаанд Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis [40], Trypanosoma cruzi [41], Leishmania [42] зэрэг олон шимэгч хорхойн үрэвслийн идэвхжилтэй холбоотой байдаг гэж мэдээлсэн.Toxoplasma gondii-ийн хоруу чанартай холбоотой нягт мөхлөгт уураг GRA35, GRA42, GRA43 нь Льюис хархны макрофагуудад пироптозыг өдөөхөд шаардлагатай байдаг [43].Нэмж дурдахад лейшманиагийн зарим судалгаанууд шимэгч мембраны липофосфогликан [44] эсвэл цайрын металлопротеаз [45] зэрэг NLRP3 үрэвсэлд оролцдог бие даасан молекулуудад анхаарлаа хандуулсан.Анексинтэй төстэй альфа-гиардины гэр бүлийн генийн дотроос альфа-1 гиардин нь хулганы загварт G. duodenalis-аас хамгаалах вакцинд нэр дэвшигч болох нь батлагдсан [18].Бид судалгаандаа G. duodenalis-ийн хоруу чанарын хүчин зүйл болох альфа-2 ба альфа-7,3 гиардиныг сонгосон бөгөөд эдгээр нь гиардид өвөрмөц боловч харьцангуй бага бүртгэгдсэн.Эдгээр хоёр зорилтот генийг үрэвслийн идэвхжүүлэлтийн шинжилгээнд зориулж pcDNA3.1(+) эукариот экспрессийн системийн вектор руу хуваасан.
Манай хулганын загварт хуваагдсан каспазын хэлтэрхий нь үрэвслийн идэвхжлийн маркер болдог.Өдөөлтийн үед NLRP3 нь ASC-тэй харилцан үйлчилж, прокаспазуудыг цуглуулж, идэвхтэй каспазуудыг үүсгэдэг бөгөөд pro-IL-1β ба pro-IL-18-ийг боловсорч гүйцсэн IL-1β ба IL-18 болгон хуваадаг.Үрэвслийн каспазууд (каспаз-1, -4, -5 ба -11) нь төрөлхийн хамгаалалтанд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг, үрэвсэл, программчлагдсан эсийн үхэлд оролцдог цистеины протеазуудын хадгалагдсан гэр бүл юм [46].Каспас-1 нь каноник үрэвслийн [47]-ээр идэвхждэг бол каспаз-4, -5, -11 нь атипик үрэвслийн үед хуваагддаг [48].Энэ судалгаанд бид хулганы хэвлийн макрофагуудыг загвар болгон ашиглаж, G. duodenalis халдварын судалгаанд p20 caspase-1 задарсан каспаза-1-ийг NLRP3-ийн үрэвслийн идэвхжлийн шинж тэмдэг болгон судалсан.Үр дүн нь олон альфа-гиардинууд үрэвслийн ердийн идэвхжүүлэлтийг хариуцдаг болохыг харуулсан бөгөөд энэ нь бактери, вируст оролцдог гол хоруу чанарын молекулуудыг илрүүлсэнтэй нийцэж байна.Гэсэн хэдий ч бидний судалгаа нь зөвхөн урьдчилсан скрининг бөгөөд сонгодог бус үрэвсэлийг идэвхжүүлэх бусад молекулууд байдаг, учир нь бидний өмнөх судалгаагаар G. duodenalis халдварын үед сонгодог болон сонгодог бус үрэвслийн аль аль нь илэрсэн байна [13].Үүсгэсэн p20 каспаза-1 нь NLRP3 үрэвсэлтэй холбоотой эсэхийг тодорхойлохын тулд бид альфа-2 ба альфа-7.3 лямбийг хулганын хэвлийн макрофаг руу шилжүүлж, гол молекулын уургийн илэрхийлэл болон ASC олигомеризацийн түвшинг тодорхойлж, α-гиардин хоёулаа идэвхжиж байгааг баталгаажуулав. үрэвсэлт NLRP3.G. muris эсвэл E. coli EPEC омгуудаар Caco-2 эсийг өдөөх нь NLRP3, ASC болон каспаза-1-ийн флюресценцийн эрчмийг нэмэгдүүлэх боломжтой гэж мэдээлсэн Manko-Prykhoda нараас бидний үр дүн арай өөр байна. Хэдийгээр тийм ч их биш боловч G. muris болон E. coli-ийн костимуляци нь гурван уургийн түвшинг хэрхэн нэмэгдүүлэв [49].Энэ зөрүү нь Giardia төрөл, эсийн шугам, анхдагч эсийн сонголтын ялгаатай байдлаас шалтгаалж болно.Мөн бид G. duodenalis-д илүү мэдрэмтгий 5 долоо хоногтой эмэгтэй WT C57BL/6 хулганад MCC950 ашиглан in vivo шинжилгээ хийсэн.MCC950 нь хүчтэй, сонгомол жижиг молекул NLRP3 дарангуйлагч бөгөөд наномоль концентрацид каноник ба каноник бус NLRP3 идэвхжүүлэлтийг блоклодог.MCC950 нь NLRP3 идэвхжүүлэлтийг дарангуйлдаг боловч AIM2, NLRC4, NLRP1 үрэвслийн замууд эсвэл TLR дохионы замуудыг идэвхжүүлэхэд нөлөөлдөггүй [27].MCC950 нь NLRP3 идэвхжүүлэлтийг блоклодог боловч NLRP3-ийн эхлэл, K+ урсгал, Ca2+ урсгал болон NLRP3 болон ASC хоорондын харилцан үйлчлэлийг саатуулдаггүй;оронд нь ASC олигомержилтыг хааж NLRP3 үрэвслийн идэвхжилтийг дарангуйлдаг [27].Тиймээс бид гиардин тарилгын дараа NLRP3 үрэвслийн үүргийг тодорхойлохын тулд MCC950-ийг in vivo судалгаанд ашигласан.Идэвхжүүлсэн каспаза-1 p10 нь үрэвслийн эсрэг цитокинуудыг pro-IL-1β болон pro-IL-18-ийг боловсорч гүйцсэн IL-1β болон IL-18 болгон задалдаг [50].Энэхүү судалгаанд MCC950-тэй эсвэл байхгүй гиардинаар эмчилсэн хулганын ийлдэс дэх IL-1β-ийн түвшинг NLRP3 үрэвсэл идэвхжсэн эсэхийг тодорхойлох үзүүлэлт болгон ашигласан.Хүлээгдэж буйгаар MCC950 эмчилгээ нь ийлдэс дэх IL-1β-ийн түвшинг мэдэгдэхүйц бууруулсан.Эдгээр өгөгдөл нь G. duodenalis giardin alfa-2 ба giardin alfa-7.3 нь NLRP3 хулганы үрэвсэлийг идэвхжүүлэх чадвартай болохыг тодорхой харуулж байна.
Сүүлийн 10 жилийн хугацаанд хуримтлагдсан чухал мэдээлэл нь IL-17A нь G. muris-ийн эсрэг дархлааны үндсэн зохицуулагч, IL-17RA дохиог өдөөдөг, нянгийн эсрэг пептидүүдийг үүсгэдэг, комплементийн идэвхжилтийг зохицуулдаг болохыг харуулж байна [51].Гэсэн хэдий ч Giardia-ийн халдвар залуу насанд хүрэгчдэд илүү их тохиолддог бөгөөд залуу хулганад Giardia-ийн халдвар нь хамгаалалтын нөлөө үзүүлэхийн тулд IL-17A-ийн хариу урвалыг идэвхжүүлдэггүй [52] гэж судлаачид бусад дархлааг сайжруулдаг Giardia-г хайхад хүргэсэн.гельминт халдварын механизм.Сүүлийн үеийн судалгааны зохиогчид G. muris нь E. coli EPEC-ээр NLRP3 үрэвсэлийг идэвхжүүлж, нянгийн эсрэг пептидийн үйлдвэрлэлийг дэмжиж, гэдэсний зам дахь трофозоитын тоог бууруулж, улмаар бүдүүн гэдэсний хүндрэлийг бууруулдаг гэж мэдэгджээ. нянгаар үүсгэгддэг өвчин [49 ].NLRP3 үрэвсэл нь янз бүрийн өвчний хөгжилд оролцдог.Судалгаанаас үзэхэд Pseudomonas aeruginosa нь эсийн үхэлээс зайлсхийхийн тулд макрофагуудад аутофаги үүсгэдэг бөгөөд энэ үйл явц нь NLRP3 үрэвслийн идэвхжилээс хамаардаг [53].N. caninum-ийн хувьд реактив хүчилтөрөгчийн төрөл зүйлээр зуучлагдсан NLRP3 үрэвслийн идэвхжил нь түүний эзэнд репликацийг хязгаарлаж, түүнийг эмчилгээний боломжит зорилт болгодог [9].Paracoccidioides brasiliensis нь хулганын ясны чөмөгөөс гаралтай дендрит эсэд NLRP3 үрэвслийн идэвхжлийг өдөөж, улмаар хостыг хамгаалахад чухал үүрэг гүйцэтгэдэг үрэвсэлт цитокин IL-1β ялгаруулдаг болохыг тогтоожээ [10].L. amazonensis, L. major, L. braziliensis, L. infantum chagasi зэрэг хэд хэдэн төрлийн лейшмани нь макрофаг дахь NLRP3 болон ASC-аас хамааралтай каспаза-1, түүнчлэн лейшманиагийн халдварыг идэвхжүүлдэг.NLRP3/ASC/caspase-1 генийн дутагдалтай хулганад шимэгчийн репликацийг сайжруулдаг [11].Замбони нар.Лейшманийн халдвар нь макрофаг дахь NLRP3 үрэвслийн идэвхжлийг өдөөдөг бөгөөд энэ нь эсийн доторх шимэгч хорхойтнуудын репликацийг хязгаарладаг.Тиймээс Leishmania зайлсхийх стратеги болгон NLRP3 идэвхжүүлэлтийг саатуулж болно.In vivo судалгаагаар NLRP3 үрэвсэл нь лейшманийг устгахад хувь нэмэр оруулсан боловч эдэд нөлөөлөөгүй [54].Үүний эсрэгээр, гельминтозын судалгаанд NLRP3 үрэвслийн идэвхжсэн нь ходоод гэдэсний гельминтозын эсрэг эзний хамгаалалтын дархлааг дарангуйлдаг [12].Шигелла бол дэлхий даяар суулгалт өвчин үүсгэдэг гол бактерийн нэг юм.Эдгээр бактери нь P2X7 рецептороор дамждаг K+ урсгал, реактив хүчилтөрөгчийн төрөл, лизосомын хүчиллэг, митохондрийн гэмтэл зэргээр IL-1β нийлэгжилтийг өдөөж болно.NLRP3 үрэвсэл нь макрофагуудын фагоцитоз болон шигеллагийн эсрэг бактери устгах үйл ажиллагааг сөргөөр зохицуулдаг [55].Плазмодиумын судалгаагаар AIM2, NLRP3 эсвэл каспаза-1 дутагдалтай хулганууд плазмодиумаар халдварласан 1-р төрлийн интерфероныг өндөр түвшинд гаргаж, плазмодиумын халдварт илүү тэсвэртэй болохыг харуулсан [56].Гэсэн хэдий ч хулганад NLRP3 үрэвслийн эмгэг төрүүлэгч идэвхжилтийг өдөөх альфа-2 гиардин ба альфа-7.3 гиардины үүрэг тодорхойгүй байна.
Энэхүү судалгаагаар MCC950-ээр NLRP3 үрэвслийн дарангуйлал нь BW-ийг бууруулж, хулганад гэдэс угаах шингэн дэх трофозоитын тоог нэмэгдүүлснээр арван хоёр гэдэсний эдэд илүү ноцтой эмгэг өөрчлөлтийг бий болгосон.Альфа-2 гиардин ба альфа-7.3 гиардин нь эзэн хулганы NLRP3 үрэвслийг идэвхжүүлж, хулганын биеийн жинг нэмэгдүүлж, гэдэс угаах шингэн дэх трофозоитын тоог бууруулж, арван хоёр нугасны эмгэгийн эмгэгийг намдаана.Эдгээр үр дүн нь G. duodenalis нь альфа-2 гиардин ба альфа-7,3 гиардинаар дамжуулан NLRP3 хостын үрэвсэлийг идэвхжүүлж, хулганад G. duodenalis-ийн эмгэг төрүүлэх чадварыг бууруулдаг болохыг харуулж байна.
Альфа-2 ба альфа-7.3 гиардинууд нь NLRP3-ийн үндсэн үрэвслийн идэвхжлийг өдөөж, хулганад G. duodenalis-ийн халдварыг бууруулдаг болохыг бидний үр дүн харуулж байна.Тиймээс эдгээр молекулууд нь гиардиазаас урьдчилан сэргийлэх ирээдүйтэй зорилтууд юм.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
Liang AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM.Giardiasis: тойм.Саяхан Пат инфламм эмэнд харшилтай болох нь тогтоогдсон.2019;13:134–43.
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: эмийн эмчилгээний тойм.Эм зүйчийн мэргэжилтний дүгнэлт.2007;8: 1885–902.
Тянь Хуафэн, Чен Бин, Вэн Жианфэн.Giardiasis, эмэнд тэсвэртэй байдал, шинэ зорилтуудыг илрүүлэх.Эмийн зорилтот эмгэгийг халдварладаг.2010;10:295–302.
Ван З, Жан Х, Шиао И, Жан В, Ву Х, Цинь Т гэх мэт NLRP3 үрэвсэл, үрэвсэлт өвчин.Оксид Мед эсийн Longev.2020;2020:4063562.
Chen GY, Núñez G. Гэдэсний үрэвсэл, хорт хавдар дахь үрэвслийн үүрэг.Гастроэнтерологи.2011;141:1986–99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. Дархлаа тэсвэрлэх чадвар ба гэдэсний үрэвслийн уулзвар дахь каноник ба атипик NLRP3 үрэвслийн идэвхжүүлэлт.өмнөх дархлаа.2017;8:36.
Ли Л, Ван XC, Гонг ПТ, Жан Н, Жан Х, Ли С, нар.ROS-ээр дамждаг NLRP3 үрэвслийн идэвхжүүлэлт нь N. caninum халдварын хариу урвалд оролцдог.Паразит вектор.2020;13:449.